Lesson 1 of 20
증명의 두 축 — mRNA 로 재나 단백질로 재나
논문 Figs. S7A·S7B (qPCR) 와 Fig. S9 (웨스턴블롯)
/perturb 에서 siRNA 를 넣고 shRNA 안정주를 만들었습니다.
그런데 정말 꺼졌을까요?
재는 방법이 둘 있습니다. 그리고 둘은 다른 것을 잽니다.
🧬 qRT-PCR — mRNA 를 잰다
빠르다 (하루)
정량이 정확하다
여러 유전자를 함께
다만 mRNA 가 줄어도 단백질은 남아 있을 수 있다
정량이 정확하다
여러 유전자를 함께
다만 mRNA 가 줄어도 단백질은 남아 있을 수 있다
🧷 웨스턴블롯 — 단백질을 잰다
실제로 일하는 것을 본다
크기까지 확인된다
인산화 상태도 볼 수 있다
다만 이삼일 걸리고 정량이 거칠다
크기까지 확인된다
인산화 상태도 볼 수 있다
다만 이삼일 걸리고 정량이 거칠다
논문은 둘 다 했습니다. 그리고 각각 다른 자리에 썼어요.
| 무엇을 보려고 | 방법 | 논문 |
|---|---|---|
| Ddx54 넉다운이 됐나 | qRT-PCR | Figs. S7A · S7B |
| 신호 경로가 꺼졌나 | 웨스턴블롯 | Fig. S9 (Wnt · Jak-Stat3 · NF-κB · Myc) |
| CD38 · CD47 이 줄었나 | 웨스턴블롯 | Figs. 3 · S8C · S12E/F |
둘째 줄이 특히 중요합니다. 인산화된 단백질(p-STAT3 같은)은 mRNA 로는 볼 수 없어요 — mRNA 양이 그대로여도 인산기가 붙었는지 떨어졌는지가 달라지니까요.
🤔 Check yourself
STAT3 의 인산화 상태가 변했는지 보려면 어떤 방법을 써야 할까요?
Answer 인산화는 단백질에 인산기가 붙는 것입니다. mRNA 양과는 상관이 없어요. 그래서 p-STAT3 전용 항체가 따로 있습니다(Table S4).