유박사의 분자 정량 첫걸음

껐다는 것을
증명한다

「넉다운했다」 는 주장입니다. 재서 보여 줘야 증명이 됩니다.
mRNA 로 재는 길(qRT-PCR)과 단백질로 재는 길(웨스턴블롯)을 나란히 따라가며, 두 길이 왜 다른 답을 낼 수 있는지까지 갑니다.

🧬 qRT-PCR📐 ΔΔCt🧷 웨스턴블롯 🎯 항체🇰🇷 한국어

1강 시작하기 →

이렇게 배웁니다

📄논문의 한 줄에서 시작

모든 강이 논문 부록의 방법 문단 한 줄을 펼친 것입니다. 강마다 어느 대목인지 부제에 적어 두었습니다.

▶️숫자를 직접 굴려 보기

계산과 곡선을 전부 브라우저 안에서 손으로 굴려 봅니다. 설치할 것이 없습니다.

🎛️다르게 정해 보기

값을 바꿔 보면 결론이 어디서 흔들리는지 보입니다. 위젯이 그것을 위해 있습니다.

⚖️말할 수 있는 것까지만

마지막 강은 이 실험으로 말할 수 있는 것과 말할 수 없는 것을 갈라 놓습니다.

전체 커리큘럼

증명의 두 축 — mRNA 로 재나 단백질로 재나

논문 Figs. S7A·S7B (qPCR) 와 Fig. S9 (웨스턴블롯)

실리카 컬럼 — 붙였다 씻고 떼어 낸다

SI 「RNA was extracted from samples using the RNA-spin kit (iNtRON)」

NanoDrop — A260/280 과 A260/230 이 말해 주는 것

SI 「its quantity was assessed using a NanoDrop spectrophotometer」

cDNA 합성 — RNA 를 DNA 로 베낀다

SI 「cDNA was synthesized ... using the DiaStar RT kit (Solgent)」

Table S5 를 뜯어본다 — 프라이머 열 쌍

SI Table S5 「List of primers used in this study」

엑손 경계에 걸친다 — 게놈 DNA 를 피하는 설계

게놈 DNA 오염을 프라이머로 푸는 방법

SYBR Green — 이중가닥에 끼면 빛난다

SI 「with 2X Taq premix (Solgent) and SYBR Green (GeNet Bio)」

Ct — 형광이 문턱을 넘는 사이클

SI 「performed on the QuantStudio5 (Applied Biosystem)」

융해곡선 — 봉우리가 둘이면 무엇이 잘못됐나

SYBR 을 쓸 때 반드시 함께 보는 것

기준 유전자 — Gapdh 를 믿어도 되나

SI Table S5 「Gapdh (mouse)」·「β-actin (mouse)」

【실습】 ΔΔCt — Ct 표에서 상대 발현량까지

논문 Fig. S7A 의 막대가 나오는 계산

단백질을 뽑는다 — 용해버퍼의 여섯 성분

SI 「20 mM HEPES (pH7.2), 150 mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 10% glycerol, 0.1% SDS」

인산화효소 억제제 — p-STAT3 를 보려면 필수

SI Table S4 의 p-JAK1 · p-JAK2 · p-STAT3 · p-p65

SDS-PAGE — 크기대로 줄을 세운다

왜 모양이 아니라 크기로만 갈리나

전사와 블로킹 — 막으로 옮기고 빈자리를 막는다

젤 속의 단백질에는 항체가 닿지 못한다

Table S4 를 읽는다 — 항체 열넷과 네 경로

SI Table S4 「Antibodies used for western blot analysis」

로딩대조군 GAPDH — 없으면 어떤 주장이 무너지나

SI Table S4 「anti-GAPDH, Cell signaling 5174」

밴드를 숫자로 — 포화와 노출 시간의 함정

웨스턴블롯 정량이 거친 이유

【실습】 Fig. S9 를 읽는다 — 전체 블롯과 잘라낸 그림

논문 Fig. S9 「Full blots of western blot analysis used in this study」

정리 — cMYC·CD38·CD47 이 내려갔다는 증거 사슬

말할 수 있는 것과 말할 수 없는 것