4강 / 20강
cDNA 합성 — RNA 를 DNA 로 베낀다
SI 「cDNA was synthesized ... using the DiaStar RT kit (Solgent)」
PCR 에 쓰는 중합효소는 DNA 를 주형으로만 일합니다. 그러니 RNA 를 세려면 먼저 DNA 로 베껴야 해요.
그 일을 하는 것이 역전사효소(reverse transcriptase) 입니다. RNA 를 읽어 상보적인 DNA — complementary DNA — 를 만듭니다.
RNA →(역전사효소)→ cDNA →(PCR)→ 셀 수 있다
그런데 역전사효소도 시작할 자리가 필요합니다. 프라이머죠. 여기서 선택이 갈립니다.
올리고 dT
mRNA 의 polyA 꼬리에 붙는다
좋다 mRNA 만 골라 베낀다 (rRNA 를 피한다)
나쁘다 꼬리 쪽에 치우친다 · polyA 없는 RNA 는 못 본다
좋다 mRNA 만 골라 베낀다 (rRNA 를 피한다)
나쁘다 꼬리 쪽에 치우친다 · polyA 없는 RNA 는 못 본다
랜덤 헥사머
여섯 글자짜리 아무 서열이 아무 데나 붙는다
좋다 전체를 고루 베낀다 · 부서진 RNA 도 된다
나쁘다 rRNA 까지 다 베낀다 (대부분이 rRNA 다)
좋다 전체를 고루 베낀다 · 부서진 RNA 도 된다
나쁘다 rRNA 까지 다 베낀다 (대부분이 rRNA 다)
qPCR 용 키트는 보통 둘을 섞어 씁니다. 논문이 쓴 DiaStar RT kit 도 그런 종류예요.
🤔 확인 문제
qPCR 을 하려면 RNA 를 먼저 cDNA 로 바꿔야 하는 이유는?
해설 Taq 같은 DNA 중합효소는 DNA 주형에서만 일합니다. 그래서 역전사효소로 먼저 DNA 사본을 만들어요.