Lesson 10 of 20
293T 에서 바이러스 만들기 — 그리고 BSL-2
SI 「HEK293T cells were utilized to generate lentivirus」
절차는 이렇습니다.
1. HEK293T 에 네 플라스미드를 함께 넣는다 (리포펙션)
2. 이삼일 기다린다 — 세포가 입자를 조립해 배지로 내보낸다
3. 배지(상등액)를 걷는다 — 이 액체가 바이러스다
4. 0.45 µm 필터로 세포 부스러기를 거른다
5. 표적 세포(LLC1 · A549)에 그 액체를 부어 준다
3번이 놀라운 대목입니다. 우리가 얻는 것은 그냥 배지예요. 눈으로는 아무 차이가 없습니다. 그 안에 입자가 들어 있을 뿐입니다.
왜 293T 인가는 /wetlab 5강에서 봤습니다 —
SV40 large T 항원이 있어 플라스미드가 세포 안에서 수십 배로 불어나니까요.
수율이 떨어지는 자리
| 단계 | 흔한 실수 | 결과 |
|---|---|---|
| 293T 상태 | 계대수가 높거나 밀도가 낮다 | 수율이 크게 떨어진다 |
| 플라스미드 비율 | 전달 벡터를 너무 많이 | 포장 부품이 모자라 빈 입자가 는다 |
| 수확 시점 | 너무 이르거나 늦다 | 이르면 적고, 늦으면 세포가 죽어 부스러기가 섞인다 |
| 필터 | 0.22 µm 를 쓴다 | 입자(약 100 nm)가 막에 붙어 잡힌다 → 0.45 µm 를 쓴다 |
| 보관 | 얼렸다 녹이기를 반복 | 한 번마다 역가가 크게 떨어진다 → 소분해 얼린다 |
🤔 Check yourself
렌티바이러스 상등액을 거를 때 0.22 µm 대신 0.45 µm 필터를 쓰는 이유는?
Answer 입자 지름이 필터 구멍과 자릿수가 가깝습니다. 0.22 µm 를 쓰면 상당수가 막에 걸리거나 붙어 역가가 크게 떨어져요.