Lesson 3 of 20

좋은 현탁액이란 — 죽은 세포와 이중체

실험 품질 · 게이팅으로 뺄 수 있는 것과 없는 것

해리를 거친 액체 안에는 우리가 원하지 않는 것이 셋 섞여 있습니다.

💀

죽은 세포

항체를 아무 데나 붙인다 — 가짜 양성

👯

이중체

둘이 붙어 지나간다 — 없는 세포를 만들어 낸다

🌫️

부스러기

세포가 아닌 조각 — 수를 부풀린다

이 셋은 게이팅으로 뺄 수 있습니다(9강). 그런데 뺄 수 있다고 해서 아무래도 좋은 것은 아니에요.

High school좋은 현탁액이란

유세포분석기에 넣기 전에 확인할 것들이 있습니다.

확인	기준
생존율	80~90% 이상
덩어리 없음	여과 후 · 필요하면 다시
농도	기기가 처리할 수 있는 범위
부스러기 적음	죽은 세포 조각

현탁액이 나쁘면 게이팅으로도 못 고칩니다.

이중체가 특히 고약합니다. T 세포 하나와 대식세포 하나가 붙어 지나가면, 기기는 그것을 CD3 도 양성이고 CD11b 도 양성인 세포 하나로 읽습니다.

그런 세포는 존재하지 않습니다. 그런데 자료에는 있습니다.

이중체율 ∝ 세포 농도

세포를 빽빽하게 넣을수록 이중체가 늘어납니다. 그래서 해리 뒤에 알맞게 희석하는 것이 중요해요.

High school죽은 세포가 문제인 이유

죽은 세포가 하는 일	결과
항체를 비특이적으로 흡수	모든 채널이 밝아짐 — 가짜 양성
자가형광이 강함	배경 상승
부스러기를 만듦	기기 신호가 지저분해짐

죽은 세포는 스펀지처럼 항체를 빨아들입니다 — 무엇에나 양성으로 보입니다.

그래서 생존 염색을 반드시 넣습니다. 막이 손상된 세포에만 들어가는 염료로 죽은 세포를 표시하고, 게이팅에서 빼요.

모형은 단순하지만 '농도가 높을수록 급히 는다' 는 모양은 실제와 같습니다.

Python Runs in your browser

# 이중체는 우연히 두 세포가 같은 순간에 지나갈 때 생긴다 — 포아송으로 어림
import math

def 이중체율(초당세포):
    # 기기가 한 번에 '한 개' 로 읽는 시간창을 대략 10 µs 로 본다
    창 = 10e-6
    람다 = 초당세포 * 창           # 창 안에 들어오는 세포 수의 기댓값
    # 한 개 이상이 이미 있는데 또 들어올 확률
    P0 = math.exp(-람다)
    P1 = 람다 * math.exp(-람다)
    return 1 - (P0 + P1) / (1 - P0) if P0 < 1 else 0

print(f"{'초당 세포':>10}  {'이중체율':>8}")
for r in (500, 1000, 3000, 5000, 10000, 20000):
    print(f"{r:>10,}  {이중체율(r):>7.2%}")

print()
print("빠르게 밀어 넣을수록 이중체가 늡니다.")
print("게이팅으로 상당수는 뺄 수 있지만, 애초에 적게 만드는 편이 낫습니다.")

High school이중체가 문제인 이유

세포 두 개가 붙어 함께 지나가면 기기는 하나의 큰 세포로 읽습니다.

상황	기기가 보는 것	결론
CD8 세포 + 종양세포가 붙음	둘 다 양성인 세포 하나	존재하지 않는 세포 유형
같은 세포 둘	신호가 두 배	발현이 높다고 오해

이중체는 새로운 세포 유형처럼 보입니다 — 흥미로운 발견인 줄 알기 쉽습니다.

High school게이팅으로 뺄 수 있는 것과 없는 것

뺄 수 있는 것	못 빼는 것
죽은 세포 — 생존 염색	흩는 과정에서 이미 사라진 세포
이중체 — 산란광 폭·면적	표면 표지자가 잘린 세포
부스러기 — FSC/SSC	애초에 안 나온 세포 유형

오른쪽 열은 화면에 없습니다 — 없는 것은 뺄 수도 없고 세어지지도 않습니다.

🤔 Check yourself

이중체(doublet)가 자료에 남으면 무엇이 문제일까요?