Lesson 4 of 20
Fc 차단 — 항체가 엉뚱한 데 붙는 것을 막는다
SI 「incubated with a Fc block reagent (anti-CD16/32, clone 2.4G2)」
항체는 Y 자 모양입니다. 두 끝이 하는 일이 다릅니다.
문제가 여기 있습니다. 우리가 넣은 형광항체의 Fc 꼬리를 대식세포·단핵구의 Fc 수용체가 덥석 잡아 버립니다.
그러면 그 세포는 표적이 없는데도 형광을 냅니다. "CD8 이 없는 대식세포가 CD8 양성으로 보이는" 일이 벌어져요.
해결은 단순합니다. 먼저 Fc 수용체를 막아 둡니다.
1. 형광이 붙지 않은 항-CD16/32 항체(클론 2.4G2)를 먼저 넣는다
2. 그것이 Fc 수용체를 미리 다 차지한다
3. 그다음에 형광항체를 넣는다 — 이제 붙을 자리가 Fab 쪽뿐이다
논문이 쓴 그대로입니다.
Prior to staining, cells were incubated with a Fc block reagent
(anti-CD16/32 (clone 2.4G2, Becton Dickinson)) to reduce non-specific
antibody binding.
CD16 과 CD32 가 바로 마우스의 Fc 수용체입니다. 그것을 겨냥한 항체로 자리를 막아 둔 것이에요.
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Fc 차단을 하지 않으면 어느 세포에서 가장 문제가 생기기 쉬울까요?
Answer Fc 수용체(CD16/32)는 먹어치우는 세포에 많습니다. 대식세포가 형광항체의 꼬리를 덥석 잡으면 표적이 없는데도 양성으로 보입니다.