유박사의 mRNA 합성 시약 첫걸음

방법 문단은
처방전이다

“The PCR mix contained 10 U of LA Taq, 10× buffer II, dNTP Mixture (200 nM each), 4.8 ng DNA Template…” — 한 문장에 시약이 여섯 들어 있습니다.
이 강의는 Wei 2023 의 방법 문단을 목록으로 펴고, 시약 서른 가지를 하나씩 집어 듭니다. 무엇이고, 왜 그 농도이고, 빼면 무엇이 무너지는지. 효소는 넷뿐이고 나머지는 그 넷을 돕습니다.
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이렇게 배웁니다

🧾줄글을 목록으로

방법 문단을 표로 펴는 것부터 배웁니다. 펴 놓으면 물음이 저절로 보입니다.

⚙️효소는 넷뿐이다

LA Taq · T7 · DNase · E-PAP. 서른 가지 가운데 일을 하는 것은 넷이고 나머지는 돕습니다.

🚫빼면 무엇이 무너지나

시약마다 없을 때 생기는 일을 함께 적습니다. 가장 빨리 배우는 길입니다.

🔢숫자는 논문의 숫자

0.72 M · 1.875 mM · 0.5 U/µL · 4.8 ng. 논문에 없는 값은 가정이라고 적습니다.

전체 커리큘럼

방법 문단 한 단락이 시약 서른 가지다

Wei 2023 · Experimental section 다섯 단락을 목록으로 편다

물 — 가장 많이 넣고 가장 만만하게 보는 시약

Wei 2023 · Experimental section — DEPC 처리수 0.1% · RNase Zap · 오토클레이브

RNase 억제제 0.5 U/µL — 적을 막는 시약

Wei 2023 · Experimental section — 결합·세척 완충액 둘 다 0.5 U/µL

Tris-HCl 과 EDTA — 물의 성질을 정해 두는 일

Wei 2023 · Experimental section — Tris 20 · 40 · 10 mM (pH 7.5) · EDTA 1 mM

NaCl 0.72 M 과 LiCl 1.6 M — 왜 소금이 두 종류인가

Wei 2023 · Experimental section — 포획은 NaCl, 정제는 LiCl

LA Taq 10 U — 효소를 “개수” 가 아니라 “일” 로 센다

Wei 2023 · Experimental section “PCR” — LA Taq 10 U · 10× buffer II (Mg²⁺ Plus)

dNTP 200 nM — 단위 하나가 천 배다

Wei 2023 · Experimental section “PCR” — dNTP Mixture (200 nM each)

프라이머 200 nM 과 비오틴 — 어디부터 어디까지 베낄지 정하는 시약

Wei 2023 · Experimental section “PCR” · Fig. 1a — Prime F·R 각 200 nM · 58 °C 45초

주형 4.8 ng — 눈에 보이지 않는 양에서 시작한다

Wei 2023 · Experimental section “PCR” — 4.8 ng DNA Template

스트렙타비딘 자성 비드 — 원심분리기를 자석으로 바꾼 시약

Wei 2023 · Experimental section — 친수 코팅 비드(NEB) · 1 mL · 30 °C · 45분

“T7 중합효소 혼합 20 µL” — 단위가 U 가 아니라 부피다

Wei 2023 · Experimental section “IVT” — 20 µL of T7 polymerase enzyme mix (Promega) · 5× buffer

rNTP 넷 — 셋은 1.875 mM, 하나는 0.225 mM

Wei 2023 · Experimental section “IVT” — rATP·rCTP·rUTP 각 1.875 mM · rGTP 0.225 mM

캡 유사체 0.375 mM — 이름이 적히지 않은 시약

Wei 2023 · Experimental section “IVT” — 0.375 mM cap analog (Promega)

RQ1 RNase-Free DNase 10 U — 이름에 “RNase 없음” 을 적어 파는 시약

Wei 2023 · Experimental section “IVT” — RQ1 RNase-free DNase (Promega) 10 U · 37 °C 15분

E-PAP 40 U 과 MnCl₂ 2.5 mM — 금속을 바꿔 넣는 효소

Wei 2023 · Experimental section “IVT” — E-PAP 40 U · 5× buffer · MnCl₂ 2.5 mM · ATP 1 mM · 37 °C 1시간

oligo d(T)₂₅ 비드 — 꼬리를 낚는 시약, 그리고 “3.2 µL 의 2.0 mM”

Wei 2023 · Experimental section “IVT” — 결합 100 µL · 65 °C 5분 · 세척 200 µL × 2 · 용출 200 µL

지질 벡터와 에탄올 — 시약 이름이 “lipid vectors” 한 마디뿐이다

Wei 2023 · Experimental section “LNP encapsulation” · Fig. 5 — 지질 300 : mRNA 900 µL/min

재는 시약 — 젤 · 래더 · 배지도 시약이다

Wei 2023 · Experimental section · Fig. 3c·4e·5d·6d — 1% 아가로스 TAE · RNA 6000 래더 · DMEM

【실습】 다섯 통을 처음부터 조제한다

Wei 2023 · Experimental section 전체 — 저장액에서 반응통까지

시약표 한 장과, 논문이 적지 않은 것

Wei 2023 전체 — 재현할 수 있는 줄과, 재현할 수 없는 줄