17. 지질 벡터와 에탄올 — 시약 이름이 “lipid vectors” 한 마디뿐이다 · Dr. Yoo's mRNA Synthesis Reagents, First Steps

마지막 걸음입니다. 그런데 시약 쪽에서 보면 이 걸음이 가장 비어 있습니다. 논문이 적은 것은 이만큼입니다.

적힌 것	값
“lipid vectors dissolved in ethanol”	지질을 에탄올에 녹였다
유량비	지질 300 : mRNA 수용액 900 µL/min = 1 : 3
결합의 성질	“electrostatic interaction” — 정전기적
출처	저자 그룹의 앞선 논문(참고문헌 42)의 시티딘일/양이온 지질

지질의 이름 · 몰비 · 농도가 없습니다. 이 강의에서 가장 큰 빈칸입니다.

두 유량을 밀어 보세요. 혼합 직후의 에탄올 비율과 N/P 감각이 함께 바뀝니다.

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유량비를 에탄올 농도로 바꿔 읽습니다. 그러면 이 숫자가 왜 결과를 정하는지 보입니다.

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# 유량비 1:3 이 뜻하는 것 — 혼합 직후의 에탄올 농도
q_lipid, q_rna = 300.0, 900.0        # µL/min (논문)
etoh_pct = q_lipid / (q_lipid + q_rna) * 100
print("유량 지질 %.0f : mRNA %.0f µL/min" % (q_lipid, q_rna))
print("혼합 직후 에탄올 = %.1f %%" % etoh_pct)
print()
print("왜 이 숫자가 중요한가")
print("  에탄올이 많으면 지질이 계속 녹아 있어 알갱이가 크고 헐렁해진다")
print("  에탄올이 갑자기 묽어지면 지질이 순식간에 뭉쳐 알갱이가 된다")
print("  즉 '얼마나 갑자기 묽어지나' 가 알갱이 크기를 정한다")
print()
for ratio in (1, 2, 3, 5):
    q = q_lipid * ratio
    print("  유량비 1:%d → 혼합 직후 에탄올 %5.1f %%" % (ratio, q_lipid / (q_lipid + q) * 100))
print()
print("논문의 결과: 111.1 +- 2.08 nm, PDI 0.203 +- 0.015 (Fig. 5b)")
print()
print("주의: 논문은 1:3 만 시험했다. 위 표의 다른 값들은 '무엇이 바뀌는지' 를 보려는 계산이다.")

에탄올도 시약이다 — 남으면 문제가 된다

있어야 하는 이유

지질은 물에 녹지 않습니다. 에탄올이라야 녹아 흐를 수 있습니다. 알갱이를 만드는 순간까지는 필수입니다.

남으면 생기는 일

세포에 독성이 있고, 알갱이가 시간이 지나며 커집니다. 실제 제조에서는 만든 뒤 투석이나 한외여과로 에탄올을 뺍니다.

이 논문에는 에탄올 제거 단계가 적혀 있지 않습니다. 그리고 LNP 모듈은 상자 밖의 별도 장비입니다(Fig. 5a). “template-in, vaccines-out” 이라는 제목을 시약 쪽에서 읽으면 마지막 걸음이 아직 상자 안에 없다는 것이 보입니다.

🤔 Check yourself

유량비 1:3 이 알갱이 크기를 정하는 까닭은?

🤔 Check yourself

이 논문의 시약 기재에서 가장 큰 빈칸은?