For cell lysis, we used a lysis buffer containing 20 mM HEPES (pH 7.2),
150 mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 10% glycerol, and 0.1% SDS.
This buffer was supplemented with 0.1% of phosphatase inhibitor cocktail.
두 문장입니다. 그런데 여섯 가지 결정이 들어 있어요.
다르게 정했으면 결과가 달라졌을 결정들입니다.
성분을 눌러 보세요 — 각각이 무슨 일을 하고, 빼면 무엇이 무너지는지 나옵니다.
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성분
무슨 일
빼면
강
20 mM HEPES pH 7.2
pH 를 붙잡는다
단백질이 변성될 수 있다
3강
150 mM NaCl
이온세기를 준다
비특이 결합이 남는다
4강
0.5% Triton X-100
막을 녹인다
세포가 안 깨진다
6강
10% 글리세롤
단백질을 안정시킨다
보관 중 활성이 준다
7강
0.1% SDS
남은 결합을 푼다
덜 풀린 덩어리가 남는다
6·8강
탈인산화효소 억제제
인산기를 지키다
p-STAT3 띠가 사라진다
—
이 20강의 뼈대
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논문의 용해 완충액에 탈인산화효소 억제제를 넣은 이유는?
Answer 세포를 깨면 탈인산화효소도 풀려나와 인산기를 뗍니다. 그러면 실제로는 켜져 있던 STAT3 가 웨스턴에서 안 보여요 — 결론이 뒤집힙니다.