Lesson 14 of 20
SYBR Green — 이중가닥에 끼어들면 밝아진다
SI 「QuantStudio5 · 2X Taq premix · SYBR Green」
qPCR 은 DNA 가 늘어나는 것을 실시간으로 봅니다. 그러려면 DNA 양을 빛으로 바꿔야 해요. SYBR Green 이 그 일을 합니다.
물에 떠 있을 때
분자가 자유롭게 흔들려 에너지를 열로 흘려버립니다. 어둡습니다.
이중가닥에 끼었을 때
염기 사이에 끼어 고정됩니다. 흔들 데가 없으니 에너지가
빛으로 나와요 — 약 1,000배 밝아집니다.
ΔΔCt 계산이 왜 <b>뺄셈</b>인지도 여기서 나옵니다 — 로그에서 뺄셈은 나눗셈이니까요.
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낮은 쪽 작은 봉우리가 <b>프라이머 다이머</b>입니다 — 짧아서 Tm 이 낮아요.
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SYBR Green 이 이중가닥 DNA 에 끼면 밝아지는 이유는?
Answer 자유롭게 흔들릴 때는 에너지가 열로 빠져나갑니다. 염기 사이에 끼면 흔들 수 없으니 그 에너지가 형광으로 나와요 — 약 1,000배 밝아집니다.
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qPCR 에서 Ct 가 3.3 낮다는 것은?
Answer 사이클마다 두 배씩 늘어나므로 2^3.32 = 10 입니다. Ct 는 주형 개수의 로그예요.