5강 / 20강
완충액 — 왜 20 mM HEPES pH 7.2 인가
SI 「Western blot analysis」의 용해 완충액
논문의 용해 완충액 첫 줄입니다.
a lysis buffer containing 20 mM HEPES (pH 7.2), 150 mM NaCl,
0.5% Triton X-100, 10% glycerol, and 0.1% SDS
왜 HEPES 이고, 왜 pH 7.2 이며, 왜 20 mM 일까요.
완충의 원리 — 짝산·짝염기가 함께 있으면 된다
pH = pKa + log₁₀ ( [염기형] / [산형] )
헨더슨-하셀바흐 식입니다. 산을 부으면 염기형이 H⁺ 를 받아 산형이 되고, 분수가 조금 줄 뿐입니다 — 로그 안이라 pH 는 거의 안 움직여요.
그런데 염기형이 다 떨어지면 더 받을 게 없습니다. 그때부터 pH 가 곤두박질칩니다. 그래서 완충 범위는 pKa ± 1 뿐입니다.
가운데(50%)에서 곡선이 가장 <b>평평합니다</b> — 그 자리가 pKa 이고 완충이 가장 셉니다.
Python
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인산과 HEPES 가 맞습니다. 아세트산은 pKa 가 2.4 나 떨어져 아예 못 씁니다.
Python
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🤔 확인 문제
pH 7.2 완충액을 만들려 합니다. 가장 부적절한 것은?
해설 완충 범위는 pKa ± 1 입니다. 아세트산은 pKa 가 4.76 이라 pH 7.2 에서는 염기형이 거의 100% — 산을 조금만 부어도 pH 가 무너집니다.